სიახლეები

Javascript ამჟამად გამორთულია თქვენს ბრაუზერში.ამ ვებსაიტის ზოგიერთი ფუნქცია არ იმუშავებს, თუ JavaScript გამორთულია.
დარეგისტრირდით თქვენი კონკრეტული დეტალებითა და საინტერესო წამლის მითითებით და ჩვენ შევადარებთ თქვენს მიერ მოწოდებულ ინფორმაციას სტატიებს ჩვენს ვრცელ მონაცემთა ბაზაში და დაუყოვნებლივ გამოგიგზავნით PDF ასლს.
დინგ ჯინნუო, ჟაო ვეიფენგი, ინფექციური დაავადებების დეპარტამენტი, სუჯოუს უნივერსიტეტის პირველი შვილობილი საავადმყოფო, სუჟოუ ქალაქი, ჯიანგსუს პროვინცია, 215000 ტელ.საჭმლის მომნელებელი სისტემის სიმსივნეები 5 წლიანი საერთო გადარჩენით 14,1%.ბევრი პაციენტი HCC-ით დიაგნოზირებულია მოწინავე სტადიაზე, ამიტომ ადრეული სკრინინგი აუცილებელია HCC-დან სიკვდილიანობის შესამცირებლად.გარდა საყოველთაოდ გამოყენებული გამოვლენის ინდიკატორებისა, როგორიცაა შრატის ალფა-ფეტოპროტეინი (AFP), ლინზების ლექტინ-რეაქტიული ალფა-ფეტოპროტეინი (AFP-L3) და პათოლოგიური პროთრომბინი (K ვიტამინის დეფიციტით გამოწვეული ცილა II, PIVKA-II), სითხის ბიოფსიის ტექნიკა. ნაჩვენებია, რომ მას აქვს დიაგნოსტიკური მნიშვნელობა HCC-ის გამოვლენისას.ინვაზიურ პროცედურებთან შედარებით, სითხის ბიოფსიას შეუძლია გამოავლინოს მოცირკულირე ავთვისებიანი მეტაბოლიტები.თხევადი ბიოფსიის ტექნიკა აღმოაჩენს მოცირკულირე სიმსივნურ უჯრედებს, მოცირკულირე სიმსივნის დნმ-ს, მოცირკულირე რნმ-ს და ეგზოზომებს და გამოიყენება HCC-ის ადრეული სკრინინგისთვის, დიაგნოსტიკისა და პროგნოზული შეფასებისთვის.ეს სტატია მიმოიხილავს მოლეკულურ ბიოლოგიას და სითხის ბიოფსიის სხვადასხვა ტექნიკის გამოყენებას პერსპექტიული ბიომარკერების იზოლირებისთვის, რომლებიც შეიძლება იყოს ეფექტური ვარიანტები HCC-ის ადრეული შეფასებისთვის მაღალი რისკის HCC ჯგუფების ადრეული სკრინინგის გასაუმჯობესებლად.საკვანძო სიტყვები: სითხის ბიოფსიის ტექნიკა, ჰეპატოცელულარული კარცინომა, მაღალი რისკის ჯგუფი.
ჰეპატოცელულარული კარცინომა (HCC) არის საჭმლის მომნელებელი ტრაქტის გავრცელებული ავთვისებიანი სიმსივნე, რომელიც მეექვსე ადგილზეა ავთვისებიანი სიმსივნეების ახალ შემთხვევებს შორის როგორც მამაკაცებში, ასევე ქალებში.1 მსოფლიო მასშტაბით, ღვიძლის კიბო კიბოს სიკვდილის მესამე წამყვანი მიზეზია ფილტვის და კოლორექტალური კიბოს შემდეგ, რაც შეადგენს კიბოსთან დაკავშირებული სიკვდილიანობის 8.3%-ს ყველა ავთვისებიანი ნეოპლაზმიდან.1 HCC-ის პროგნოზი მჭიდროდ არის დაკავშირებული დიაგნოზის სტადიასთან.HCC-ში ცუდი გადარჩენის ძირითადი მიზეზებია ინტრაჰეპატური მეტასტაზები, პორტალური ვენური სიმსივნური თრომბები და შორეული მეტასტაზები, რომლებიც ხელს უშლიან რეზექციას, და ამ მახასიათებლებს შორის ბევრი უკვე წარმოდგენილია პაციენტებში დიაგნოზის დროს.
დიაგნოსტიკური და მკურნალობის გაიდლაინებიდან გამომდინარე, HCC-ის განვითარების ძირითადი რისკ-ფაქტორებია ღვიძლის ციროზი, ქრონიკული B ჰეპატიტის ვირუსი (HBV) ან C ჰეპატიტის ვირუსი (HCV) ინფექცია, ალკოჰოლური ცხიმოვანი ღვიძლის დაავადება და არაალკოჰოლური ცხიმოვანი ღვიძლის დაავადება (NAFLD). ).გარდა ამისა, HCC-ის რისკ-ფაქტორები მოიცავს აფლატოქსინით დაბინძურებული საკვების მიღებას, შისტოსომიაზს, ციროზის სხვა გამომწვევ მიზეზებს, ღვიძლის კიბოს ოჯახურ ისტორიას, დიაბეტის, სიმსუქნის, მოწევას და ნარკოტიკებით გამოწვეული ღვიძლის დაზიანებას.35 და 45 წლის მაღალი რისკის ჯგუფები რეგულარულად უნდა გაიარონ სამედიცინო შემოწმება.ადრეული სკრინინგი არის მნიშვნელოვანი ადრეული მკურნალობის სტრატეგია HCC-ის მქონე პაციენტების საერთო გადარჩენის გასაუმჯობესებლად.
ბიომარკერები, როგორიცაა AFP, AFP-L3 და PIVKA-II, რეკომენდებულია HCC3,4-ის ადრეული სკრინინგისთვის.თხევადი ბიოფსიის ტექნიკამ აჩვენა პერსპექტიული შედეგები ადრეულ დიაგნოზსა და მკურნალობის შეფასებაში.5,6 მნიშვნელოვანი პროგრესი იქნა მიღწეული HCC თხევადი ბიოფსიაში, რომელსაც შეიძლება ჰქონდეს უფრო მაღალი მგრძნობელობა და სპეციფიკა, ვიდრე ჩვეულებრივ გამოყენებული შრატის მარკერები, როგორიცაა AFP (ცხრილი 1).
AFP არის ფართოდ გამოყენებული ბიომარკერი HCC-ში და ამჟამად არის ყველაზე დეტალური ბიომარკერი, რომელიც ფართოდ გამოიყენება დაავადების ადრეული სკრინინგისთვის, დიაგნოსტიკისა და შეფასებისთვის.მუდმივი ამაღლებული AFP დონე განიხილება HCC-ის პროგრესირების რისკის ფაქტორად.7,8 მცირე ჰეპატოცელულური კარცინომის (sHCC) გამოვლენის სიხშირე იზრდება ულტრაბგერითი და კომპიუტერული ტომოგრაფიის განვითარებასთან ერთად, და აღმოჩნდა, რომ AFP განსაკუთრებით არასენსიტიურია hHCC-ის გამოვლენის მიმართ კლინიკურ პრაქტიკაში.რეტროსპექტული მულტიცენტრული კვლევის მიხედვით9, AFP დადებითი აღმოჩნდა HCC შემთხვევების 46% (616/1338) და sHCC შემთხვევების 23.4% (150/641).გარდა ამისა, AFP დონე ამაღლებულია პაციენტებში, რომლებსაც აქვთ ღვიძლის ქრონიკული დაავადება და ციროზი.10 ამრიგად, AFP-ს აქვს შეზღუდული სკრინინგის ეფექტი sHCC-სთვის.11 ჰეპატოცელულარული კარცინომის აზია-წყნარი ოკეანის კლინიკური პრაქტიკის სახელმძღვანელოს მიხედვით, AFP-ის გამოყენება არ არის რეკომენდებული.12 კლინიკური მტკიცებულება ვარაუდობს, რომ PIVKA-II აღემატება AFP-ს HCC-ის მკურნალობაში და რომ PIVKA-II და AFP-ის კომბინაციას აქვს უფრო მაღალი დიაგნოსტიკური მნიშვნელობა HCC-ში.13 ქსოვილის ბიოფსიასთან შედარებით, სითხის ბიოფსია ძირითადად აღმოაჩენს სიმსივნესთან დაკავშირებულ მეტაბოლიტებს სხეულის სითხეებში (სისხლი, ნერწყვი, პლევრის სითხე, ცერებროსპინალური სითხე ან შარდი) და ნაკლებად ინვაზიურია ქსოვილებისთვის.14 გარდა ამისა, თხევადი ბიოფსიები შეიძლება ასახავდეს ავთვისებიან მახასიათებლებს, რომლებიც არ არის წარმოდგენილი პირველად სიმსივნის ქსოვილში.15 თხევადი ბიოფსიები კლინიკურ პრაქტიკაში ჯერ არ არის ტესტირება ყველა ტიპის სიმსივნეზე, მაგრამ მათი დიაგნოსტიკური პოტენციალი კიბოს დროს იპყრობს ონკოლოგების ყურადღებას.16 სითხის ბიოფსიას შეუძლია აღმოაჩინოს მოცირკულირე სიმსივნური უჯრედები (CTCs), მოცირკულირე სიმსივნის დნმ (cDNA), მოცირკულირე თავისუფალი რნმ (ecRNA) და ეგზოსომები.ამ სტატიაში განვიხილავთ სითხის ბიოფსიის სხვადასხვა ტექნიკის მახასიათებლებს, როლს და გამოყენებას მაღალი რისკის HCC ჯგუფების ადრეულ სკრინინგში.
უჯრედგარე დნმ (cfDNA) ჯანმრთელი ადამიანების სისხლის ნიმუშებში პირველად 1948 წელს აღწერა მანდელმა და სხვებმა.17 cfDNA არის უჯრედებისგან თავისუფალი დნმ-ის ფრაგმენტი დაახლოებით 160-180 bp სიგრძით, რომელიც წარმოიქმნება ძირითადად ლიმფოციტებიდან და მიელოიდური უჯრედებიდან.ctDNA არის სპეციფიკური მუტანტური დნმ-ის ფრაგმენტი, რომელიც გამოიყოფა სიმსივნური უჯრედების მიერ პერიფერიულ სისხლში, რომელიც წარმოადგენს სიმსივნური უჯრედების გენომურ ინფორმაციას გარკვეული პათოფიზიოლოგიური პროცესების შემდეგ, მათ შორის ნეკროზი, აპოპტოზი და ექსკრეცია.ctDNA-ს პროპორცია მთლიან cfDNA-ში ფართოდ განსხვავდება სიმსივნის ტიპის მიხედვით და cDNA ფრაგმენტები, როგორც წესი, სიგრძით 167 bp-ზე ნაკლებია.18 Underhill-ის კვლევამ აჩვენა, რომ cfDNA ფრაგმენტები ზოგადად უფრო მოკლეა ვიდრე ნორმალური cfDNA.19 ჯანმრთელ ადამიანებთან შედარებით, cfDNA ფრაგმენტების საერთო სიგრძე კიბოს პაციენტების სისხლში უფრო მოკლეა, ამიტომ cfDNA შეიძლება გამოყენებულ იქნას როგორც ადრეული სიმსივნის სკრინინგის მაჩვენებელი.cfDNA ფრაგმენტების სიგრძის გარკვეული ქვეჯგუფების გამდიდრებამ შეიძლება გააუმჯობესოს cDNA-ს გამოვლენა, რომელიც დაკავშირებულია არამეტასტაზურ მყარ სიმსივნეებთან.კვლევებმა აჩვენა, რომ ctDNA გვხვდება პანკრეასის, მსხვილი ნაწლავის, შარდის ბუშტის, კუჭ-ნაწლავის, ღვიძლის, საკვერცხეების, სარძევე ჯირკვლის, მელანომის და თავისა და კისრის სიმსივნეების 75%-ზე მეტს.20,21 თუმცა, ctDNA-ს რაოდენობა სისხლში დამოკიდებულია სიმსივნის მდებარეობაზე.22 Bettegoud-ის მიერ ჩატარებულ კვლევაში, მსხვილი ნაწლავის, სარძევე ჯირკვლის, ღვიძლის, ფილტვის და პროსტატის კიბოს მქონე პაციენტებს სისხლში cDNA-ის უფრო მაღალი დონე ჰქონდათ, ვიდრე სხვა კიბოს.ამის საპირისპიროდ, პირის ღრუს კიბოს, პანკრეასის, კუჭის კიბოთი და გლიომის მქონე პაციენტებში, cDNA კონცენტრაცია სისხლში დაბალი იყო.ოცდაერთი
იმის გამო, რომ ctDNA შეიცავს იგივე გენეტიკურ მუტაციებს, როგორც პირველადი სიმსივნური უჯრედები, cDNA შეიძლება გამოყენებულ იქნას ჰეტეროგენული სიმსივნური სპეციფიკური მუტაციებისა და ეპიგენეტიკური ცვლილებების გამოსავლენად, მათ შორის მეთილაცია, ჰიდროქსიმეთილაცია, ერთი ნუკლეოტიდური ვარიაციები და ასლების რაოდენობის ვარიაციები.ოცდასამი
დნმ-ის მეთილაცია არის ერთ-ერთი ყველაზე გავრცელებული ეპიგენეტიკური ცვლილება, რომელიც იწვევს გენის რეპრესიას.ნორმალურ უჯრედებთან შედარებით, არსებობს განსხვავებები სიმსივნური უჯრედის გენომის მეთილაციის საერთო დონეზე, განსაკუთრებით სიმსივნის სუპრესორული გენების მეთილაციაში, რომელიც შეიძლება გამოვლინდეს ადრეულ ეტაპზე, რაც ვარაუდობს, რომ დნმ-ის მეთილაციის ცვლილებები შეიძლება იყოს ადრეული ინდიკატორი. სიმსივნური გენეზის გამოვლენა.სიმსივნის სუპრესორული გენები, რომლებიც დაკავშირებულია HCC-თან, შეიძლება ინაქტივირებული იყოს პრომოტორული მეთილაციით, რითაც ასტიმულირებს სიმსივნურ გენებს.24 დნმ-ის მეთილაცია იდეალური მარკერია სიმსივნეების ადრეული დიაგნოსტიკისთვის მისი ქსოვილის სპეციფიკურობის, გამოვლენის და ასაკობრივი დამოუკიდებლობის გამო.გარდა ამისა, დნმ-ის მეთილაცია უფრო ხშირია სომატურ მუტაციებთან შედარებით, რადგან სამიზნე გენომის თითოეულ რეგიონში არის მეტი სამიზნე რეგიონი და რამდენიმე შეცვლილი CpG ადგილი.25 მრავალი CpG ადგილის გარდა, ctDNA-ში დამოუკიდებელი ჰიპერმეთილირებული ლოკების დიდი რაოდენობა გამოვლენილია DBX2, THY1, MT1M, INK4A, VIM, FBLN1 და RGS10.26 Xu et al.CfDNA ნიმუშების შედარება 1098 HCC პაციენტისგან და 835 ჯანსაღი კონტროლის გენები, რომლებიც დაკავშირებულია HCC-თან, აღმოჩნდა, რომ მტკიცედ იყო დაკავშირებული პლაზმის cDNA მეთილაციის შესაბამის ხელმოწერებთან.25 ლაბორატორიული ანალიზის საფუძველზე შემუშავდა პროგნოზირებადი მოდელი, რომელიც შეიცავდა 10 მეთილაციის მარკერს მგრძნობელობით და სპეციფიკურობით 85.7% და 94.3%, შესაბამისად, და ეს მარკერები იყო მაღალი კორელაცია სიმსივნის მასასთან, სიმსივნის სტადიასთან და მკურნალობაზე პასუხთან.ეს შედეგები მიუთითებს, რომ cDNA მეთილაციის მარკერების გამოყენება დიდ პერსპექტივას იძლევა HCC-ის დიაგნოსტიკაში, მონიტორინგსა და პროგნოზში.მეთილაციის მოდელში, რომელიც შედგება სამი არასწორად მეთილირებული გენისაგან (APC, COX2, RASSF1A) და ერთი miRNA (miR203), წარმოდგენილი Lu et al27-ის მიერ, 27 მოდელის მგრძნობელობა და სპეციფიკა HBV-თან ასოცირებული HCC-ის დიაგნოსტიკისთვის შედარებადი იყო.80%.გარდა ამისა, მოდელს შეუძლია აღმოაჩინოს არადიაგნოსტირებული HCC პაციენტების 75%, AFP-ის დონე 20 ნგ/მლ.Ras-თან ასოცირებული დომენის ოჯახის 1A პროტეინის გენი (RASSF1A) არის მთავარი განმეორებადი დნმ-ის თანმიმდევრობა ადამიანის გენომში.არაუჯო და სხვ.დაასკვნა, რომ RASSF1A პრომოტორის ჰიპერმეთილაცია შეიძლება იყოს ღირებული ბიომარკერი HCC-ის ადრეული სკრინინგისთვის და პოტენციური მოლეკულური სამიზნე ეპიგენეტიკური თერაპიისთვის.28 ერთ კვლევაში, შრატის RASSF1A პრომოტორის ჰიპერმეთილაცია აღმოჩნდა HCC-ით დაავადებულთა 73.3%-ში.29 დიდხანს შერწყმული ნუკლეოტიდური ელემენტი 1 (LINE-1) არის კიდევ ერთი უაღრესად აქტიური რეტროტრანსპოზიციის შუამავალი.LINE-1-ის ჰიპომეთილაცია აღმოჩნდა HCC შრატის ნიმუშების 66.7%-ის დნმ-ში და ასოცირებული იყო ადრეულ რეციდივთან და ცუდ გადარჩენასთან რადიკალური რეზექციის შემდეგ.29 ჰიპერმეთილაცია არის საერთო გენეტიკური პროცესი, რომელიც უნიკალურ როლს თამაშობს ღვიძლის ციროზის და HCC-ის განვითარებაში.30 ამის საპირისპიროდ, ჰიდროქსიმეთილაცია არის დემეთილაციის პროცესი, რომელიც იწვევს გენის რეაქტივაციას და ექსპრესიას, და ამ პროცესში 5-ჰიდროქსიმეთილციტოზინის (5-hmC) პროდუქტის გამოვლენა შეიძლება გამოყენებულ იქნას სიმსივნის იდენტიფიცირებისთვის.cDNA-ს მეთილაცია და ჰიდროქსიმეთილაცია ასოცირდება სიმსივნის გენეზთან და შესაძლოა ხელი შეუწყოს HCC-ის ადრეულ სკრინინგს.2554 სუბიექტის კვლევაში, 31 გენომის მასშტაბით 5-hmCs იქნა ნაპოვნი cfDNA ნიმუშებში და 32 გენი იდენტიფიცირებული იყო 5-hmC თანმიმდევრობების შედარებით HCC პაციენტებში და მაღალი რისკის ჯგუფებში, როგორიცაა ქრონიკული დაავადებები.ღვიძლის დაავადებების დიაგნოსტიკური მოდელები.და ციროზი.ეს მოდელი აღემატებოდა AFP-ს HCC-ს არასიმსივნური ქსოვილისგან განასხვავებლად.
კოდირების რეგიონებში მუტაციებმა შეიძლება გამოიწვიოს ტრანსკრიპციული დარღვევები, რამაც შეიძლება გამოიწვიოს ცილების თანმიმდევრობის ცვლილებები და საბოლოოდ კიბო.ერთი ნუკლეოტიდის ვარიანტები მნიშვნელოვანი გენომიური მარკერებია სიმსივნის ადრეული სკრინინგისთვის მათი მაღალი ქსოვილის საიმედოობისა და სიმსივნისა და ქსოვილის მაღალი სპეციფიკის გამო.HCC-თან დაკავშირებულმა მრავალმა კვლევამ, რომელიც იყენებს შემდეგი თაობის თანმიმდევრობას (NGS) კიბოს ეგზომისა და მთლიანი გენომის თანმიმდევრობისთვის, გამოავლინა საერთო მუტაციური უჯრედული გენები, როგორიცაა TP53 და CTNNB1, ისევე როგორც რამდენიმე, მათ შორის ARID1A, MLL, IRF2.ახალი გენები, ATM, CDKN2A, FGF19, PIK3CA, RPS6KA3 და JAK1 აჩვენებს მუტაციის ზომიერ სიხშირეს. მუტანტური გენის ფუნქციის ანალიზი ვარაუდობს, რომ ცვლილებები ქრომატინის რემოდელირებაში, Wnt/β-კატენინის და JAK/STAT სიგნალის გადაცემაში, P53-უჯრედული ციკლის გზაზე, ეპიგენეტიკური მოდიფიკატორები, ოქსიდაციური სტრესის გზები, PI3K/AKT/MTOR გზა და RAS/RAF/ MAPK კინაზას გზა გადამწყვეტ როლს თამაშობს HCC ონკოგენეზში.32,33 კვლევაში, რომელშიც სიმსივნესთან დაკავშირებული მუტაციები იქნა აღმოჩენილი, ჰუანგმა და სხვებმა დაადგინეს, რომ სიმსივნური ასოცირებული მუტაციების სიხშირე ctDNA-ზე დამოკიდებული იყო 19.5%, ხოლო სპეციფიკა იყო 90%. .34 გარდა ამისა, პაციენტებს, რომლებსაც განუვითარდათ სისხლძარღვთა ინვაზია, აღენიშნებოდათ ctDNA მუტაციები (P=0.041) და ხანმოკლე გადარჩენა რეციდივის გარეშე (P<0.001). მუტანტური გენის ფუნქციის ანალიზი ვარაუდობს, რომ ცვლილებები ქრომატინის რემოდელირებაში, Wnt/β-კატენინის და JAK/STAT სიგნალის გადაცემაში, P53-უჯრედული ციკლის გზაზე, ეპიგენეტიკური მოდიფიკატორები, ოქსიდაციური სტრესის გზები, PI3K/AKT/MTOR გზა და RAS/RAF/ MAPK კინაზას გზა გადამწყვეტ როლს თამაშობს HCC ონკოგენეზში.32,33 კვლევაში, რომელშიც სიმსივნესთან დაკავშირებული მუტაციები იქნა აღმოჩენილი, ჰუანგმა და სხვებმა დაადგინეს, რომ სიმსივნური ასოცირებული მუტაციების სიხშირე ctDNA-ზე დამოკიდებული იყო 19.5%, ხოლო სპეციფიკა იყო 90%. .34 გარდა ამისა, პაციენტებს, რომლებსაც განუვითარდათ სისხლძარღვთა ინვაზია, აღენიშნებოდათ ctDNA მუტაციები (P=0.041) და ხანმოკლე გადარჩენა რეციდივის გარეშე (P<0.001).მუტანტური გენის ფუნქციის ანალიზი ვარაუდობს, რომ ცვლილებები ქრომატინის რემოდელირებაში, Wnt/β-კატენინის და JAK/STAT სიგნალიზაციაში, P53 უჯრედის ციკლის გზაზე, ეპიგენეტიკური მოდიფიკატორები, ოქსიდაციური სტრესის გზები, PI3K/AKT/MTOR გზა და RAS/RAF/MAPK კინაზას ბილიკები. კრიტიკული როლი HCC სიმსივნის გენეზში.32,33 კვლევაში, რომელმაც აღმოაჩინა სიმსივნესთან დაკავშირებული მუტაციები, Huang et al.აღმოჩნდა, რომ ctDNA-დამოკიდებული სიმსივნური მუტაციების სიხშირე იყო 19.5%, ხოლო სპეციფიკა 90%..34 Кроме того, у пациентов со сосудистой инвазией чаще встречались мутации цДНК (P=0,041) და более короткая безрецидивная выживаемость (P<0,001). .34 გარდა ამისა, სისხლძარღვთა ინვაზიის მქონე პაციენტებს ჰქონდათ მეტი cDNA მუტაცია (P=0.041) და უფრო ხანმოკლე გადარჩენა დაავადებისგან თავისუფალი (P<0.001).მუტანტის გენების ფუნქციურმა ანალიზმა გამოავლინა ქრომატინის რემოდელირება, Wnt/β-კატენინი და JAK/STAT სიგნალიზაცია, P53 უჯრედის ციკლის გზა, ეპიგენეტიკური მოდიფიკატორები, ოქსიდაციური სტრესის გზა, PI3K/AKT/MTOR გზა და RAS/RAF/MAPK კინაზის გზა გადამწყვეტ როლს თამაშობს HCC-ის ონკოგენეზში. 32,33 在 一 项 检测 到 肿瘤 相关 突变 的 研究 中 ， ， 等 等 人 肿瘤 相关 突变 依赖于 依赖于 依赖于 的 频率 为 为 为 为 为 为 ， 特异性 特异性 特异性 90% .34 此外 ， 经历 血管 侵犯 的 患者 患者 更 更 有 有 有 有 有 有 有 有 更 有 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更.突变（P=0.041）和更短的无复发生存期（P<0.001）. 31短的无复发生存期（P<0.001）.32,33 კვლევაში, რომელმაც აღმოაჩინა სიმსივნესთან დაკავშირებული მუტაციები, Huang et al.აღმოაჩინა, რომ სიმსივნესთან ასოცირებული მუტაციები 19.5% იყო დამოკიდებული cDNA-ზე სპეციფიკურობით 90% 34. გარდა ამისა, პაციენტებს, რომლებმაც გაიარეს სისხლძარღვთა ინვაზია, უფრო მეტად განვითარდა cDNA.мутация (P = 0,041) и более короткая безрецидивная выживаемость (P <0,001). მუტაცია (P=0.041) და დაავადებისგან თავისუფალი გადარჩენის ხანმოკლე პერიოდი (P<0.001).კიდევ ერთი გავრცელებული HCC მამოძრავებელი გენი არის TP53, რომელსაც აქვს მუტაციის მაჩვენებელი 30%-ზე მეტი.კვლევებმა აჩვენა, რომ ctDNA-ში TP53 მუტაციების სიხშირე სისხლში და შარდში მერყეობს 5%-დან 60%-მდე.35 იოჰანის კვლევამ აჩვენა, რომ გვიან HCC-ში ctDNA მუტაციის სპექტრს აქვს ადრეული HCC-ის მსგავსი მუტაციის სიხშირე, მათ შორის TERT პრომოტორი (51%), TP53 (32%), CTNNB1 (17%), PTEN (8%), მუტაციები AXIN1., ARID2, KMT2D და TSC2 (თითოეული 6%).36 β-კატენინის (CTNNB1) ონკოგენი მნიშვნელოვან როლს ასრულებს Wnt სასიგნალო გზაზე.ტრანსკრიპციის კოაქტივატორ CTNNB1-ს შეუძლია ხელი შეუწყოს გენის ექსპრესიას, რამაც შეიძლება გამოიწვიოს უჯრედების პროლიფერაცია, აპოპტოზის დათრგუნვა და ანგიოგენეზი.CTNNB1 ასევე შეუძლია ურთიერთქმედება TERT-თან ჰეპატოციტების ტრანსფორმაციის ინდუცირებისთვის.33 TERT პრომოტორი ხშირად მუტაციას განიცდის ზოგიერთ მყარ სიმსივნეში.TERT-ის ცვლილებამ, ერთ-ერთმა ადრეულმა გენეტიკურმა ცვლილებამ HCC-ის ავთვისებიან ტრანსფორმაციაში, შეიძლება გამოიწვიოს ტელომერაზას რეაქტივაცია ციროზულ ჰეპატოციტებში და შეიძლება ხელი შეუწყოს პროლიფერაციას და თავიდან აიცილოს დაბერება.მოხსენებული იყო, რომ მუტაციები 33-37 TERT პრომოტორში ხდება პაციენტების 59-90%-ში ღვიძლის პროლიფერაციული კვანძებით და ადრეული HCC და დაკავშირებულია გადარჩენასთან.38
ასლის რიცხვის ცვლილებები (CNA) სომატური მუტაციების მნიშვნელოვანი ქვეტიპია.კვლევამ აჩვენა, რომ CNA-ს ფართო და ფოკუსური დატვირთვა არის გენომიური ხელმოწერა, რომელსაც შეუძლია განსაზღვროს სიმსივნის იმუნური ინფილტრაცია და გამორიცხვა კიბოს ზოგიერთ სახეობაში.39 აქტიური ინფილტრაციის სიგნალიზაცია, მაღალი ციტოლიზური აქტივობა, მძიმე ანთება და გენეტიკური მარკერები, რომლებიც დაკავშირებულია ანტიგენის პრეზენტაციასთან HCC-ში.ერთი ნუკლეოტიდური პოლიმორფიზმის მონაცემთა მასივის ანალიზმა 477 სუბიექტში გამოავლინა დაბალი დატვირთვა ცნს-ზე.ამის საპირისპიროდ, ქრომოსომულად არასტაბილური სიმსივნეები მაღალი ვრცელი CNA დატვირთვით აჩვენებდნენ იმუნური უარყოფის ნიშნებს და დაკავშირებული იყო პროლიფერაციასთან, დნმ-ის შეკეთებასთან და TP53 დისფუნქციასთან.Xu და სხვ.აჩვენა, რომ HCC ჯგუფს უფრო მაღალი CNA ქულა ჰქონდა, ვიდრე ღვიძლის ქრონიკული დაავადების ჯგუფს.40 ერთი უჯრედის მთლიანი გენომის თანმიმდევრობის გამოყენებით, CNA აღმოჩნდა ჰეპატოკარცინოგენეზის დასაწყისში და შედარებით სტაბილური რჩება სიმსივნის პროგრესირების დროს.41 Chung et al.აღმოაჩინა, რომ cfDNA დონეები მნიშვნელოვნად გაიზარდა HCC პაციენტებში და რომ გენომის ვრცელი CNA-ები cfDNA-ში მნიშვნელოვანი დამოუკიდებელი პროგნოზული მარკერი იყო HCC პაციენტებში, რომლებიც მკურნალობდნენ სორაფენიბით.42 CNA-ს უფრო მაღალი ტვირთის მქონე პაციენტებს უფრო მეტად ჰქონდათ დაავადების პროგრესირება და სიკვდილი, ვიდრე დაბალი CNA ტვირთის მქონე პაციენტებში.ოლერიხი და სხვ.აღმოჩნდა, რომ ასლის რიცხვის არასტაბილურობის ინდექსი (CNI) შეიძლება გამოყენებულ იქნას CNA-ს შესაფასებლად კიბოს პაციენტებში cfDNA-ში.მათ აღნიშნეს, რომ მოწინავე კიბოს მქონე პაციენტებს ჰქონდათ მნიშვნელოვნად მაღალი CNI ქულები, ვიდრე საკონტროლო ჯგუფს, რომელიც აფასებს პაციენტის პასუხს სისტემურ ქიმიოთერაპიასა და იმუნოთერაპიაზე.43 ეს შედეგები ვარაუდობს, რომ თხევადი ბიოფსიის ნიმუშებში აღმოჩენილი CNA შეიძლება იყოს პროგნოზული ინდიკატორი პაციენტებში მოწინავე კიბოთი.HCC სისტემური თერაპიის ფონზე.
ამჟამად, ctDNA-ს გამოსავლენად გამოყენებული მეთოდები შეიძლება დაიყოს მიზანმიმართულ და არამიზნობრივ მეთოდებად.მოკლედ, მიზნობრივი მეთოდები, როგორიცაა ციფრული პოლიმერაზული ჯაჭვური რეაქცია (dPCR), BEAMing digital PCR, Amplification Refractory Mutation System-PCR, Capp-Seq და Tam-Seq, ძალიან მგრძნობიარეა წინასწარ განსაზღვრული გენების მიმართ.მიზანმიმართული მეთოდები, როგორიცაა მთელი გენომის თანმიმდევრობა და NGS, იძლევა ყოვლისმომცველ ხედვას მთელი გენომიური ლანდშაფტის შესახებ.44 სამიზნე პანელებთან შედარებით, მთელი გენომის თანმიმდევრობა შეუძლია აღმოაჩინოს არა მხოლოდ წერტილის მუტაციები და ჩასმა, არამედ გადაწყობა და ასლების რიცხვის ვარიაციები.პროგნოზი და CTC და cfDNA არის კარგი მაჩვენებლები, რომლებიც შეიძლება გამოყენებულ იქნას HCC-ის დინამიური მონიტორინგისთვის.45 გარდა ამისა, cfDNA ანალიზი შეიძლება იყოს უფრო სასარგებლო HCC-ის გამოვლენაში.იანმა და სხვებმა.აჩვენა, რომ cfDNA HCC-ის მქონე პაციენტების პლაზმაში მნიშვნელოვნად მაღალი იყო, ვიდრე ღვიძლის ფიბროზის მქონე პაციენტებში და ჯანმრთელ ჯგუფში.AFP-თან შედარებით, მოსალოდნელია, რომ ctDNA იქნება უკეთესი სკრინინგის მარკერი ადრეული HCC-სთვის.46 47 თხევადი ბიოფსიის პერსპექტიულ კვლევაში, რომლებიც ამოწმებდნენ cfDNA-ს და პროტეინს პოპულაციის პოპულაციაში, აჩვენეს, რომ ისინი ეფექტურია HCC-ით დაავადებულთა დიფერენცირებაში HCC-ის გარეშე პაციენტებისგან.331 ულტრაბგერითი ნორმალური და AFP-უარყოფითი პაციენტის შემდგომი დაკვირვებისას, cfDNA-ს მგრძნობელობა და სპეციფიკა HCC-ის დიაგნოსტირებისთვის იყო 100% და 94%, შესაბამისად, ამიტომ cDNA-ს შეეძლო HCC-ის გამოვლენა უსიმპტომო HBsAg სეროდადებით პირებში.Yeo48 კვლევაში, RASSF1A პრომოტორის ჰიპერმეთილაციის მაღალი სიხშირე (92.5%) დაფიქსირდა HCC-ის მქონე პაციენტებში.გარდა ამისა, Xu et al.შექმნა დიაგნოსტიკური მოდელი HCC-ის პროგნოზირებისთვის სპეციფიური მეთილაციის მარკერების პანელის გამოყენებით სპეციფიურობითა და მგრძნობელობით 90.5% და 83.3%, შესაბამისად.პანელი საშუალებას აძლევს პაციენტებს HCC-ით გამოირჩეოდნენ ღვიძლის სხვა დაავადებების მქონე პაციენტებისგან, რაც უკეთესია ვიდრე AFP.მათ ასევე დაადგინეს, რომ ნორმალური კონტროლის ჯგუფს, რომელიც დადებითად გამოვიდა, შეიძლება ჰქონდეთ HCC-ის რისკ-ფაქტორები, როგორიცაა HBV ინფექცია ან ალკოჰოლის მოხმარების ისტორია.25 ჩვენ ვარაუდობთ, რომ HCC-სთვის მაღალი რისკის ფაქტორებმა შეიძლება ხელი შეუწყონ cfDNA-ს ჰიპერმეთილაციას, რაც შემდგომში ხელს უწყობს HCC-ის პროგრესირებას და, შესაბამისად, cfDNA-ს შეუძლია მნიშვნელოვანი როლი ითამაშოს მაღალი რისკის ჯგუფების სკრინინგში.კაი და სხვ.შეაჯამეთ ctDNA მუტაციების სრული დიაპაზონი და შესთავაზეთ მტკიცე სტრატეგია პაციენტებში სიმსივნური ტვირთის შესაფასებლად.49 ამ სტრატეგიას შეუძლია სიმსივნური გენეზის იდენტიფიცირება მედიანური 4.6 თვით ადრე ვიზუალიზაციის ცვლილებამდე და აჩვენა უმაღლესი დიაგნოსტიკური ეფექტურობა შრატის ბიომარკერებთან შედარებით AFP, AFP-L3 და PIVKA-II.cDNA ტესტის დიაგნოსტიკური მნიშვნელობა დადასტურებულია, როდესაც გამოსახულების შეფასება არ არის ხელმისაწვდომი, ამიტომ cDNA ტესტირება მნიშვნელოვანია მაღალი რისკის ჯგუფებში HCC ადრეული დიაგნოსტიკისთვის.ცოტა ხნის წინ, მეცნიერებმა გამოიყენეს NGS ტექნოლოგია მრავალვარიანტული გენეტიკური ვარიაციის ინდიკატორების გასაანალიზებლად (მათ შორის 5-ჰიდროქსიმეთილციტოზინი, 5'-მოტივი, ფრაგმენტაცია, ნუკლეოსომის კვალი, HIFI) 3204 კლინიკურ ნიმუშებში და cfDNA-ში.50 ხელახლა დადასტურებული HIFI მოდელი სამი დამოუკიდებელი მატარებლის, ტესტის და ტესტის კომპლექტებით აჩვენებდა სტაბილურ და საიმედო დისკრიმინაციას HCC და არა HCC პოპულაციებს შორის 95.79% და 95.42% მგრძნობელობით HCC-ს სპეციფიკურ ტესტებში და ტესტებში, შესაბამისად.სქესი იყო შესაბამისად 95.00% და 97.83%.HIFI მეთოდის დიაგნოსტიკური მნიშვნელობა უფრო მაღალია, ვიდრე AFP-ის, HCC-ის ციროზისგან განასხვავებისას.გარდა ამისა, ctDNA ასევე გამოიყენება ქირურგიულ მკურნალობაში.აცუშის და სხვ.დაადგინა ctDNA-ს შრატში წინასაოპერაციო დონეები HCC-ის მქონე პაციენტებში და დაადგინა, რომ რეციდივის სიხშირე და ექსტრაჰეპატური მეტასტაზების სიხშირე cDNA დადებით ჯგუფში მნიშვნელოვნად მაღალი იყო, ვიდრე cDNA უარყოფით ჯგუფში, და cDNA დონეები მნიშვნელოვნად იყო დაკავშირებული.სიმსივნის პროგრესირებასთან ერთად.51 როგორც უაღრესად მგრძნობიარე ბიომარკერი, ctDNA-ს შეუძლია წინასწარ განსაზღვროს HCC-ის უნარი გემებში შეჭრაში.ვანგი და სხვ.ჩაატარა მთლიანი გენომის თანმიმდევრობა 46 პაციენტის HCC-ით და მრავალვარიანტულმა ანალიზმა აჩვენა, რომ cDNA ვარიანტის ალელური სიხშირის ზღვრული მნიშვნელობა მიკროსისხლძარღვებში შეჭრისთვის არის 0.83%, მგრძნობელობა 89.7% და სპეციფიკა 80.0%.დამოუკიდებელი რისკის ფაქტორი მიკროვასკულური ინვაზიისთვის რეზექტირებად HCC-ში, რაც ვარაუდობს, რომ cDNA შეიძლება დაეხმაროს ოპტიმალურ მკურნალობას.დასასრულს, ctDNA სრულად არის ჩართული HCC-ის წარმოქმნასა და განვითარებაში და შეიძლება გამოყენებულ იქნას ადრეული სკრინინგისთვის, ქირურგიული შეფასებისთვის და დაავადების მონიტორინგისთვის.
CTC არის ავთვისებიანი უჯრედები, რომლებიც წარმოიქმნება პირველადი სიმსივნეებიდან ან მეტასტაზებიდან, რომლებიც მეტასტაზებენ სისხლში.სიმსივნური უჯრედები გამოყოფენ მატრიცის მეტალოპროტეინაზებს (MMPs), რომლებიც ანადგურებენ სარდაფის მემბრანას, რაც საშუალებას აძლევს სიმსივნურ უჯრედებს პირდაპირ შევიდნენ სისხლსა და ლიმფურ ჭურჭელში.თუმცა, CTC-ების უმეტესობა სწრაფად აღმოიფხვრება ანოიკის, იმუნური შეტევის ან ათვლის სტრესის შედეგად.53 ეპითელურ-მეზენქიმური გადასვლა (EMT) საშუალებას აძლევს CTC-ებს ადვილად იზოლირებული იყოს პირველადი სიმსივნური ქსოვილისგან, შეიჭრას კაპილარებში და შეიძინოს მნიშვნელოვნად გაუმჯობესებული გადარჩენა, მეტასტაზები, ინვაზიურობა და წამლის წინააღმდეგობა.კვლევებმა აჩვენა, რომ პირველადი მეტასტაზური სიმსივნეების სიმსივნურ უჯრედებს შორის ღრმა ჰეტეროგენულობაა.ამრიგად, CTC ანალიზმა შეიძლება გამოიწვიოს სიმსივნური უჯრედების ჰეტეროგენურობის ყოვლისმომცველი გაგება.54
HCC-თან ასოცირებული CTC-ების სპეციფიკური მარკერები მოიცავს გლიპიკან-3-ს (GPC3), აზიალოგლიკოპროტეინის რეცეპტორს (ASGPR), ეპითელური უჯრედების ადჰეზიის მოლეკულას (EpCAM) და ღეროვან უჯრედებთან ასოცირებულ მარკერებს, როგორიცაა CD44, CD90, 55 და უჯრედშორისი ადჰეზია (ICAM1).) .56 GPC3 მარკერი არის უჯრედის მემბრანაზე დამაგრებული ცილა, რომელიც კლინიკურად გამოიყენება HCC-ის პათოლოგიური ანალიზისა და დახასიათებისთვის.57 GPC3-ის გამოხატვა უფრო ხშირია HCC სიმსივნურ უჯრედებში შუალედური და დაბალი დიფერენციაციის მქონე და ხელს უწყობს ღვიძლის გარეთ მიგრაციას;გარდა ამისა, GPC3+ CTC-ების არსებობა მიუთითებს მეტასტაზურ HCC-ზე.58 ASGPR არის ტრანსმემბრანული ცილა, რომელიც გამოხატულია მხოლოდ ჰეპატოციტების ზედაპირზე და ძლიერად არის გამოხატული კარგად დიფერენცირებულ HCC-ში.EpCAM არის ერთ-ერთი ყველაზე ხშირად გამოყენებული მემბრანასთან ასოცირებული ცილა CTC-ების დასაჭერად.EpCAM იდენტიფიცირებულია, როგორც ღეროვანი უჯრედების მახასიათებლების მქონე HCC უჯრედების ზედაპირული მარკერი,59, რომელიც დაკავშირებულია HCC-ის სხვადასხვა კლინიკოპათოლოგიურ მახასიათებლებთან, როგორიცაა სისხლძარღვთა ინვაზია, შეფასებული AFP დონეები და ღვიძლის კიბოს მოწინავე სტადია ბარსელონას ჰოსპიტალში (BCLC).60 CTC EMT ფენოტიპი ძალიან მეტასტაზურია.54 EMT პროცესები CTC-ში ხელს უწყობს HCC მეტასტაზს.EMT მარკერების გამოხატულება, როგორიცაა vimentin, twist, E-box თუთიის თითების შეკვრა (ZEB) 1, ZEB2, ლოკოკინა, შლაგი და E-cadherin შესწავლილი იყო ღვიძლისგან წარმოებულ CTC-ებში HCC პაციენტებში.58 ჩენგის მიერ შემუშავებულმა CanPatrol™ სისტემამ [61] CTC კლასიფიცირდა სამ ფენოტიპურ ქვეჯგუფად, ძირითადად გამოხატული მარკერების საფუძველზე: ეპითელური ფენოტიპი (EpCAM, CK8/18/19), მეზენქიმული ფენოტიპი (ვიმენტინი, დახვეული) და შერეული ფენოტიპები.176 პაციენტში მთლიანი CTC აღემატებოდა AFP-ს HCC-ის დიფერენცირებაში ღვიძლის კეთილთვისებიანი დაავადებისგან.AUC მნიშვნელობები მთლიანი CTC, AFP და კომბინირებული ჯამური CTC და AFP იყო 0.774 (95% CI, 0.704–0.834), 0.669 (95% CI, 0.587–0.750) და 0.821 (95% CI, 0.704–0.834), და 0.821 (95% CI, 6–0.7. ).), შესაბამისად.CTC კლასიფიკაცია EMT-ზე დაფუძნებული შეუძლია იწინასწარმეტყველოს HCC დიაგნოზი, ადრეული რეციდივი, მეტასტაზები და მოკლე საერთო დრო.
ამჟამად, CSC-ების გამოვლენის მეთოდები მოიცავს ფიზიკურ მეთოდებს და ბიოლოგიურ მეთოდებს.ფიზიკური მეთოდები, რომლებსაც ხშირად მოიხსენიებენ, როგორც ბიოფიზიკურ თვისებებზე დაფუძნებული გამდიდრება, ძირითადად დამოკიდებულია CSC-ის ფიზიკურ თვისებებზე, როგორიცაა ზომა, სიმკვრივე, მუხტი, მობილურობა და დეფორმაციულობა.ფიზიკური თვისებებიდან გამომდინარე, არსებობს სხვადასხვა მეთოდი, როგორიცაა ფილტრაციაზე დაფუძნებული სისტემები, დიელექტროფორეზი და ა.შ. ეს უკანასკნელი, რომელიც ასევე ცნობილია, როგორც იმუნოაფინურობაზე დაფუძნებული გამდიდრება, ძირითადად ეფუძნება ანტიგენ-ანტისხეულის შეკავშირებას, ვინაიდან მეთოდი იყენებს ანტისხეულებს სიმსივნური სპეციფიკური ბიომარკერების წინააღმდეგ. როგორიცაა EpCAM, ASGPR, ადამიანის ეპიდერმული ზრდის ფაქტორის რეცეპტორი 2 (HER2), პროსტატის სპეციფიკური ანტიგენი (PSA), ადამიანის პანციტოკერატინი (P-CK) და კარბამოილ ფოსფატ სინთაზა 1 (CPS1).62 სხვა ტიპი, რომელსაც უწოდებენ გამდიდრების მეთოდს, იყენებს ნაკადის ციტომეტრიას ლეიკოციტებისგან CTC-ების დიფერენცირების მიზნით, უფრო მაღალი ბირთვული ციტოპლაზმური თანაფარდობის და ზომის მიხედვით.ამჟამად, FDA-ს მიერ დამტკიცებული ერთადერთი ტესტი CTC-ების გამოსავლენად არის Cell-Search™ სისტემა, რომელიც იყენებს EpCAM უჯრედის ზედაპირის მარკერს. თუმცა, კომბინირებულ მარკერებზე დაფუძნებული CTC გამოვლენამ შეიძლება გაზარდოს პოზიტიურობის მაჩვენებელი.54 ASGPR-ისა და CPS1-ის წინააღმდეგ ანტისხეულების ნარევმა მიაღწია CTC-ის გამოვლენის სიხშირეს 91%-ს HCC პაციენტებში.63 Zhang et al-მა გამოიყენა CTC-ჩიპი ანტისხეულებით ASGPR, P. -CK და CPS1, და დიფერენცირებული იყო HCC პაციენტები ღვიძლის კეთილთვისებიანი დაავადების ან არა-HCC კიბოს მქონეთაგან 100%.64 ვანგის მიერ ჩატარებულმა კვლევამ აღმოაჩინა EpCAM+ CTC 42 HCC პაციენტიდან 60%-ში და აღმოაჩინა მნიშვნელოვანი კორელაცია ორივე პოზიტიურს შორის. სიხშირე და CTC-ების რაოდენობა TNM სტადიით.65 გუომ და სხვებმა დაადგინეს, რომ CTC-დან მიღებული PCR ქულა გაიზარდა 125/171 (73%) პაციენტში, რომელთა AFP დონე იყო <20 ნგ/მლ, მგრძნობელობით 72.5% და სპეციფიკა 95.0%, შედარებით AFP-სთვის 57.0% და 90.0% 20 ნგ/მლ. მაღალი რისკის ქვეშ HCC. თუმცა, კომბინირებულ მარკერებზე დაფუძნებული CTC გამოვლენამ შეიძლება გაზარდოს პოზიტიურობის მაჩვენებელი.54 ASGPR-ისა და CPS1-ის წინააღმდეგ ანტისხეულების ნარევმა მიაღწია CTC-ის გამოვლენის სიხშირეს 91%-ს HCC პაციენტებში.63 Zhang et al-მა გამოიყენა CTC-ჩიპი ანტისხეულებით ASGPR, P. -CK და CPS1, და დიფერენცირებული იყო HCC პაციენტები ღვიძლის კეთილთვისებიანი დაავადების ან არა-HCC კიბოს მქონეთაგან 100%.64 ვანგის მიერ ჩატარებულმა კვლევამ აღმოაჩინა EpCAM+ CTC 42 HCC პაციენტიდან 60%-ში და აღმოაჩინა მნიშვნელოვანი კორელაცია ორივე პოზიტიურს შორის. სიხშირე და CTC-ების რაოდენობა TNM სტადიით.65 გუომ და სხვებმა დაადგინეს, რომ CTC-დან მიღებული PCR ქულა გაიზარდა 125/171 (73%) პაციენტში, რომელთა AFP დონე იყო <20 ნგ/მლ, მგრძნობელობით 72.5% და სპეციფიკა 95.0%, შედარებით AFP-სთვის 57.0% და 90.0% 20 ნგ/მლ. მაღალი რისკის ქვეშ HCC.თუმცა, მარკერზე დაფუძნებული CTC-ების კომბინირებულმა გამოვლენამ შეიძლება გაზარდოს დადებითი შედეგების პროცენტული მაჩვენებელი.54 ანტი-ASGPR და CPS1 ანტისხეულების ნარევმა მიაღწია CTC-ის გამოვლენის სიხშირეს 91%-ს HCC-ის მქონე პაციენტებში.63 Zhang et al.გამოიყენა CTC-ჩიპი ანტისხეულებით ASGPR, P-CK და CPS1-ის წინააღმდეგ და ასევე განასხვავებდა HCC-ით დაავადებულებს ღვიძლის კეთილთვისებიანი დაავადების ან არა-HCC-ის მქონე პაციენტებისგან 100%-ით.частота и количество ЦОК со стадией TNM.65 Guo и соавторы обнаружили, что показатель ПЦР, полученный из ЦОК, был повышен у 125/171 (73%) პაციენტები, у которых чувствитель 7/2% და სპეციფიკურობა 95,0% სრავნენიიუსთან 57,0% და 90,0% AFP-ს ყიდვისას 20 ნგ/მლ. ჯგუფიп. CTC-ების სიხშირე და რაოდენობა TNM სტადიით.65 Guo-მ და სხვებმა დაადგინეს, რომ CTC-დან მიღებული PCR მომატებული იყო 125/171 (73%) პაციენტში, რომლებსაც ჰქონდათ AFP დონე <20 ნგ/მლ, მგრძნობელობით 72.5% და სპეციფიკურობით. 95.0% შედარებით 57.0% და 90.0% AFP-ისთვის 20 ნგ/მლ ათვლის დონეზე.66 AFP და CTC-ების კომბინაციამ შეიძლება გააუმჯობესოს HCC-ის გამოვლენა.45 CTC ითვლება უპირატესობად AFP-თან შედარებით ადრეულ სკრინინგში. ჯგუფები.HCC-ის მაღალი რისკით.თუმცა, მარკერზე დაფუძნებული CTC-ების კომბინირებული გამოვლენა შეიძლება გაზარდოს დადებითი შედეგების პროცენტული მაჩვენებელი.54 ანტი-ASGPR და CPS1 ანტისხეულების ნარევმა მიაღწია 91% CTC გამოვლენის სიხშირეს HCC-ის მქონე პაციენტებში.63 Zhang et al.გამოიყენა CTC ჩიპები ანტისხეულებით ASGPR, P-CK და CPS1 წინააღმდეგ და განასხვავებდა HCC-ით დაავადებულებს ღვიძლის კეთილთვისებიანი დაავადებისგან და არა-HCC-ით 100%-ით.64 ვანგის კვლევამ გამოავლინა EpCAM+ CTC-ების 60% 42 HCC პაციენტში და აღმოაჩინა მნიშვნელოვანი კორელაცია CTC-ების სიხშირესა და რაოდენობას შორის TNM სტადიაზე. 65 GUO 等 人 发现 ， 在 AFP 水平 <20 ნგ/მლ 的 125/171 (73%) 名 患者 中 ， CTC 衍生 的 PCR 评分 升高 ， 敏感性 为 为 为 为 为 ， ， ， 特异性 特异性 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 而 而 而 而 而 而 而 而 而 而 而 而 而 而 而 而 而 而 而 而 而 而 而 而值为20 ნგ/მლ 时的特异性为57.0% 和90.0%. 65 Guo 等 人 发现 在 在 在 水平 <20 ng/ml 的 125/171 (73%) 名 患者 ， ， ctc 衍生 pcr 评分 ， 敏感性 为 为 72.5%， 为 95.0%， AFP 在 截止 截止 截止 截止 截止 截止.65 გუო და სხვ.обнаружили, что у 125/171 (73%) пациентов со уровнем АФП <20 нг/мл врежали ПЦР, порученные со помощью ЦОК, были повышены со чувствительностью 72,5% на увернем АФП, каквоступство 72,5% и 95% отсечки Специфичность составляла 20 нг/мл. აღმოაჩინა, რომ 125/171 (73%) პაციენტში AFP დონე <20 ნგ/მლ, CTC-დან მიღებული PCR მნიშვნელობები ამაღლებული იყო მგრძნობელობით 72.5% და სპეციფიკა 95.0%, ხოლო AFP იყო შეწყვეტის სპეციფიკაზე. იყო 20 ნგ/მლ.მლ იყო 57.0% და 90.0%.66 ORP და CTC კომბინაცია აუმჯობესებს HCC-ის გამოვლენას.ითვლება, რომ 45 CTC აღემატება AFP-ს მაღალი რისკის მქონე HCC პოპულაციების ადრეულ სკრინინგში.ამდენად, CTC-დადებითი და მაღალი რისკის HCC ჯგუფებისთვის, CTC ტესტირება რუტინულად უნდა იყოს შერწყმული ულტრაბგერითი და AFP გამოვლენასთან.თუმცა, CTC-ები განიხილება სიმსივნის მეტასტაზების და რეციდივის მნიშვნელოვან პროგნოზირებად და CTC-ების გამოვლენა დამოუკიდებლად არ არის რეკომენდებული, როგორც დიაგნოსტიკური ინსტრუმენტი.62 ამიტომ, CTC შეიძლება იყოს უკეთესი პროგნოზირებადი ბიომარკერი, ვიდრე სხვა ამჟამად გამოყენებული მარკერები. Zhou et al-მა დაადგინა, რომ პაციენტები EpCAM+ CTC-ების და მარეგულირებელი T უჯრედების მომატებული რაოდენობით აჩვენებდნენ HCC-ის რეციდივის უფრო მაღალ რისკს, ვიდრე მათ, ვისაც CTC-ების დაბალი რაოდენობა, რეციდივების კოეფიციენტით 66.7% 10.3%-ის წინააღმდეგ (P <0.001).67. მსგავსი კვლევა მოხსენებული იქნა Zhong-ის და სხვების მიერ.68 გარდა ამისა, Qi-მ დაადგინა, რომ 112 პაციენტიდან 101-მა (90,81%) HCC-ით, მათ შორის ადრეული სტადიის დაავადების მქონე, დადებითი იყო CTC-ზე და რომ ძალიან მცირე HCC კვანძები გამოვლინდა 3-ის შემდეგ. მეთვალყურეობის 5 თვემდე. Zhou et al-მა დაადგინა, რომ პაციენტები, რომლებსაც აქვთ EpCAM+ CTC-ების და მარეგულირებელი T უჯრედების მომატებული რაოდენობა, აჩვენებდნენ HCC-ის რეციდივის განვითარების უფრო მაღალ რისკს, ვიდრე CTC-ების დაბალი რაოდენობის მქონე პაციენტებს, რეციდივების თანაფარდობით 66.7% 10.3%–ის წინააღმდეგ (P <0.001).67 A. მსგავსი კვლევა მოხსენებული იქნა Zhong-ის და სხვების მიერ.68 გარდა ამისა, Qi-მ დაადგინა, რომ 112 პაციენტიდან 101-მა (90,81%) HCC-ით, მათ შორის ადრეული სტადიის დაავადების მქონე პაციენტებში, დადებითი იყო CTC-ზე და რომ ძალიან მცირე HCC კვანძები გამოვლინდა 3-დან შემდეგ. მეთვალყურეობის 5 თვე. ჩჟოუ და др.შეცდომით, რაც არ არის ცალსახა კოლიკაობით COK EpCAM+ და რეგულირებადი T-kletok რისკ განვიხილავთ რეციდივას GЦК был უფრო მეტი, თუ პაციენტს დაბალია ოდენობით კოლიკაობით ცოკ (P6, 7,1% 1, 6,7%). Zhou et al-მა დაადგინა, რომ პაციენტებს მომატებული EpCAM+ CTC-ებით და მარეგულირებელი T უჯრედებით ჰქონდათ HCC-ის რეციდივის უფრო მაღალი რისკი, ვიდრე დაბალი CTC-ის მქონე პაციენტებს, რეციდივის სიხშირით 66.7% 10.3%-ის წინააღმდეგ (P<0.001)67.მსგავსი კვლევა ჩაატარეს ჟონგმა და სხვებმა.68. გარდა ამისა, Qi-მ აღმოაჩინა, რომ 112 პაციენტიდან 101-ს (90.81%) HCC-ით, მათ შორის ადრეული დაავადების მქონე პაციენტებში, ჰქონდათ CTC და რომ ძალიან მცირე HCC კვანძები გამოვლინდა 3-დან 5 თვემდე დაკვირვების შემდეგ. Zhou 等人发现，与CTC 数量较少的患者相比，EpCAM+ CTC 和调节性T 细胞数量升高的患者发生HCC 复发的风险更高，复发率分别为66.7% 和10.3% (P < 0.001)。 Zhou 等 人 发现 与 与 ctc 数量 少 的 患者 相比 ， epcam+ ctc 和 t 细胞 数量 的 患者 发生 hcc 复发 风险 更 ， 复发率 分别 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 10.3% ( p <0.001) ....... ჩჟოუ და др.обнаружили, что пациенты со повышенным количеством ЦОК EpCAM+ და რეგულატორნых Т-клеток დასახელებული აქვს უფრო მეტი რისკის რეციდივა GЦК по сравнению со пациентами со миньшим количество со миньшим количеством миньшим количество со миньшим количеством миньшим количеством со миньшим количеством миньшим количеством миньшим количеством со миньшим количеством ЦОК (3,6% од 1,6% 1,6%, 1% 1,6% 1,0%). ჟოუ და სხვ.დაადგინა, რომ პაციენტებს მომატებული EpCAM+ CTC-ებით და მარეგულირებელი T უჯრედებით ჰქონდათ HCC-ის რეციდივის უფრო მაღალი რისკი ნაკლები CTC-ის მქონე პაციენტებთან შედარებით, რეციდივების სიხშირით 66.7% და 10.3% შესაბამისად (P <0.001).მსგავსი კვლევა მოახსენეს Zhong-მა და სხვებმა.68 გარდა ამისა, Qi-მ აღმოაჩინა, რომ 112 HCC პაციენტიდან 101-ს (90.81%), მათ შორის ადრეული დაავადების მქონე პაციენტებს, ჰქონდათ დადებითი CTC შედეგები და აღმოაჩინეს ძალიან მცირე HCC კვანძები 3 ვიზიტის შემდეგ.დაკვირვება 5 თვემდე.მათ ასევე აღმოაჩინეს CTC 12 პაციენტში ქრონიკული HBV ინფექციით და აღმოაჩინეს მცირე HCC სიმსივნეები 5 თვის განმავლობაში 2 CTC-დადებით პაციენტში.69 ამრიგად, CTC შეიძლება გამოყენებულ იქნას HCC-ის პროგნოზირებისთვის, 70 მაგრამ ისინი შეიძლება უფრო რუტინულად გამოიყენონ, როგორც პროგნოზირებადი ბიომარკერები.
cfDNA-ს მსგავსად, cfRNA გამოიყოფა სისხლში სხვადასხვა სისტემების მეშვეობით.ეს მოლეკულები პერიფერიულ სისხლში წარმოადგენს წარმოშობის კიბოს ქსოვილს.არაინვაზიური მეთოდებით გამოვლენილ მარკერებთან შედარებით, cfRNA უფრო დინამიურად რეგულირდება, ქსოვილის სპეციფიკური და უხვადაა უჯრედგარე გარემოში.71 miRNAs (miRNAs) მნიშვნელობა და დიაგნოსტიკური მნიშვნელობა HCC-ში მოხსენებულია მრავალ კვლევაში.miRNAs არის ენდოგენური არაკოდიციური რნმ-ები (ncRNAs), რომლებიც არეგულირებენ სხვადასხვა მოლეკულურ ბიოლოგიურ აქტივობას სამიზნე მესინჯერ რნმ-ების (mRNAs) ტრანსლაციის ინჰიბირებით.miRNA-ები განლაგებულია ეგზოსომებში ჩასმული აპოპტოზურ სხეულებში, მაგრამ მათ ასევე შეუძლიათ სტაბილურად დაუკავშირდნენ შრატის ცილებს და ლიპიდებს პერიფერიულ სისხლში და შეიძლება გამოყენებულ იქნას HCC-ის შესაფასებლად.მიკრორნმ ჩართულია ღვიძლის რეგენერაციაში, ლიპიდურ მეტაბოლიზმში, აპოპტოზში, ანთებასა და HCC-ის განვითარებაში.72 ონკოგენური miRNA, როგორიცაა miR-21, miR-155 და miR-221, კარგად არის ცნობილი HCC-ში.კერძოდ, miR-21 მნიშვნელოვან როლს ასრულებს კოლაგენის სინთეზში უჯრედგარე მატრიქსში და ფიბროზში და ხელს უწყობს ჰეპატოკარცინოგენეზს ჰემატოპოეტური ღეროვანი უჯრედების გააქტიურებით.72,73 სიმსივნის სუპრესორული miRNA-ები HCC-ში მოიცავს miRNA-122, miRNA-29, Let-7 ოჯახს და miRNA-15 ოჯახს.Let-7 ოჯახი შედგება მრავალი სიმსივნის სუპრესორული miRNA-სგან, რომლებიც მიზნად ისახავს RAS ოჯახს.miR-15 ოჯახი მოიცავს miR-15a, miR-15b, miR-16, miR-195 და miR-497, რომლებსაც აქვთ დამატებითი თანმიმდევრობა გარკვეული mRNA-სთვის.გარდა ამისა, ხანგრძლივი არაკოდირების რნმ (lncRNAs) და წრიული რნმ (cirRNAs) ასევე მნიშვნელოვანია HCC-ის ადრეული სკრინინგისთვის.lncRNA-ები წარმოადგენს ncRNA-ების ყველაზე ფართო კლასს, მათ შორის mRNA მსგავსი ncRNA-ებს და მონაწილეობენ ადამიანის მრავალი დაავადების პათოგენეზში.LncRNA-ები ასრულებენ მარეგულირებელ როლს ღვიძლის მიკროგარემოში და ღვიძლის ქრონიკულ დაავადებაში.74 CircRNA ასევე წარმოადგენს ncRNA-ს კლასს, რომელსაც აქვს მრავალი ფუნქცია გენის ექსპრესიის რეგულირებაში.ბოლო დროს, circRNAs განიხილება, როგორც HCC დიაგნოსტიკური საშუალებები.
მოცირკულირე თავისუფალ რნმ-ს აქვს შესანიშნავი სტაბილურობა, მათ შორის ტემპერატურის, pH-ისა და RNase-ისადმი წინააღმდეგობის გაწევა, რაც პერიფერიული სისხლიდან fnRNA-ის გამოყოფას ნაკლებად დამღლელ ხდის რნმ-ის გაწმენდის სტანდარტული მეთოდების გამოყენებით.ყველაზე ხშირად გამოყენებული მეთოდები მოიცავს NGS, microarray და RT-qPCR.NGS საშუალებას აძლევს მიკრორნმ-ების გაზომვას მთელ გენომში.თუმცა, ეს მეთოდი ძვირია და ანალიზი არ არის სტანდარტიზებული.ამის საპირისპიროდ, RT-qPCR არის იაფი, სწრაფად აძლიერებს ნუკლეინის მჟავებს და გვთავაზობს ბევრ უპირატესობას, როგორიცაა უფრო მაღალი მგრძნობელობა, მაღალი სიზუსტე, უფრო ფართო დინამიური დიაპაზონი და ნაკლები ნიმუშების საჭიროება.მიკრო მასივები არის კიდევ ერთი მეთოდი, რომელიც გამოიყენება miRNA-ს გამოვლენისთვის, რომელიც დაფუძნებულია სამიზნე miRNA-ების მგრძნობიარე და სპეციფიკურ ჰიბრიდიზაციაზე დამატებითი დნმ-ის ზონდებით, 75 მაგრამ მიკრომასივების მონაცემების ანალიზი შრომატევადია.
მოცირკულირე miR-122 და Let-7 პოტენციურად სასარგებლოა HCC-ის ადრეული სტადიის დიაგნოსტიკაში მაღალი რისკის ჯგუფებში, მარკერებში HBV-თან ასოცირებული პრეავთვისებიანი კვანძების მქონე პაციენტებში და ადრეული სტადიის HCC.76 კაი და სხვ.დაადგინა, რომ Let-7 ოჯახის წევრები (miR-92, miR-122, miR-125b, miR-143, miR-192, miR-16, miR-126 და miR-199a/b) არიან ქრონიკული დაავადების რისკის ქვეშ. HCC ჰეპატიტის მქონე პაციენტებში.Let-7 ოჯახი შეიძლება იყოს ეფექტური სუროგატი ბიომარკერი HCC-ის განვითარების პროგნოზირებისთვის ქრონიკულ C ჰეპატიტთან ასოცირებულ მაღალი რისკის ჯგუფებში. 77 miR-122 აქვს მაღალი დიაგნოსტიკური სიზუსტე ადრეული HCC-ის გამოვლენაში ღვიძლის ციროზის მქონე პაციენტებში.78 MiR-107 მოცირკულირე შრატი ასევე შეფასებული იყო HCC-ის ადრეულ სტადიებზე, 79 და აჩვენა კარგი პოტენციალი მაღალი რისკის მქონე პოპულაციებში.Zhou et al-მა აღნიშნა, რომ miRNA-ების პანელს (miR-122, miR-192, miR-21, miR-223, miR-26a, miR-27a და miR-801) შეუძლია განასხვავოს HCC ქრონიკული B ჰეპატიტისგან (CHB) და ციროზისგან. მგრძნობელობა იყო 79.1% და 75%, ხოლო სპეციფიკურობა 76.4% და 91.1%, შესაბამისად.80 HBV-სთან დაკავშირებულ HCC-ში, ჩვენ აღმოვაჩინეთ, რომ miR150 დონეები მნიშვნელოვნად შემცირდა იმ ქრონიკულ HBV პაციენტებში HCC-ის გარეშე (მგრძნობელობა 79.1%, სპეციფიკა 76.5%) მაჩვენებელთან შედარებით.-224 იყო მომატებული HCC-ში ჯანმრთელ კონტროლთან შედარებით და ქვეჯგუფის ანალიზებმა აჩვენა უფრო მაღალი დონეები HBV-სთან ასოცირებულ HCC-ის მქონე პაციენტებში.B ჰეპატიტთან ასოცირებული ციროზით და HCC პაციენტებმა დაადგინეს siRNA კლასიფიკატორი, რომელიც შეიცავს შვიდ დიფერენციალურად გამოხატულ siRNA-ს, რომელსაც შეუძლია HCC-ის გამოვლენა სხვადასხვა კონტროლში;AUC დიაპაზონი ადრეულ სკრინინგზე უკეთესია ვიდრე AFP მოხალისეები.მათ აღმოაჩინეს, რომ ოთხ miRNA-ს (miR-1972, miR-193a-5p, miR-214-3p და miR-365a-3p) შეუძლია განასხვავოს HCC მქონე პაციენტები HCC-ის გარეშე პაციენტებისგან.ხუთი ჭარბად გამოხატული miRNA (miR-122-5p, miR-125b-5p, miR-885-5p, miR-100-5p და miR-148a-3p) განიხილება პოტენციური HBV ინფექციები HCC, ციროზი და CHB ბიომარკერებში, განსაკუთრებით miR-34a-5p შეიძლება იყოს ღვიძლის ციროზის ბიომარკერები,85 და შეიძლება იყოს პოტენციური ბიომარკერები HCC-ის ადრეული სკრინინგისთვის მაღალი რისკის პოპულაციებში.ყველაზე შესწავლილი lncRNA HCC-ში ძალიან გააქტიურებულია ღვიძლის კიბოს (HULC) დროს.სხვა კვლევებმა აჩვენა, რომ HULC, რომელიც ცირკულირებს HCC პაციენტებში, შეიძლება გამოვიყენოთ როგორც დიაგნოსტიკური მარკერი, რადგან ეს lncRNA ძალიან რეგულირდება HCC პაციენტებში ჯანმრთელ პირებთან შედარებით.71,86 სხვა lnRNA-ებს შორის, LINC00152 ითვლება საუკეთესო დიაგნოსტიკურ lncRNA-დ მისი მაღალი AUC, მგრძნობელობისა და სპეციფიკის გამო.86 ერთ კვლევაში, LINC00152-ის პერიფერიული სისხლის ექსპრესია თანდათან გაიზარდა ნორმალური ჯანსაღი კონტროლიდან პაციენტებში CHB და ციროზით და საბოლოოდ ყველაზე მაღალი იყო HCC-ში.circSMARCA5-ის ექსპრესიის კვლევებმა HCC-ის მქონე პაციენტების პლაზმაში აჩვენა HCC-ის ექსპრესიის პროგრესული დაქვეითება ჰეპატიტიდან ციროზამდე და კიბოსწინარე დაზიანებებამდე.87 ROC მრუდების ანალიზმა დაადასტურა ამ ცირკნმ-ების პოტენციალი ჰეპატიტის ან ღვიძლის ციროზის მქონე პაციენტებისგან HCC-ის მქონე პაციენტებისგან განასხვავებაში, განსაკუთრებით მათ, ვისაც AFP დონე 200 ნგ/მლ-ზე დაბალი აქვს.გარდა ამისა, ჟუმ გააანალიზა 13,617 ციკლური რნმ HBV-სთან ასოცირებული HCC პაციენტების პლაზმის ნიმუშებში და დაადასტურა, რომ 6 ციკლური რნმ განსხვავებულად იყო გამოხატული HCC და HBV-თან ასოცირებულ ციროზში, რაც ვარაუდობს, რომ cRNA შეიძლება იყოს სასარგებლო.მარკერები მაღალი რისკის ჯგუფების ადრეული სკრინინგისთვის, როგორიცაა ღვიძლის დაავადება, სკლეროზის მქონე პაციენტები.88
ეგზოსომები არის მემბრანული ვეზიკულები 40-160 ნმ დიამეტრით;მრავლობითი უჯრედშიდა ვეზიკულები ერწყმის უჯრედის მემბრანას და გამოიყოფა უჯრედგარე მატრიქსში.ისინი შეიცავს ბევრ აქტიურ კომპონენტს, მათ შორის ლიპიდებს, ცილებს, რნმ-სა და დნმ-ს და მნიშვნელოვან როლს ასრულებენ უჯრედებს შორის კომუნიკაციაში, როგორც HCC, ისე არა HCC უჯრედებს შორის.89,90 ეგზოსომა არეგულირებს HCC-ის პროგრესირებას ჰეპატოციტების ფიბრობლასტების და ვარსკვლავური უჯრედების, იმუნური უჯრედების, ნორმალური ჰეპატოციტების და HCC უჯრედების გააქტიურებით.91 სიმსივნის მიკროგარემოში სიმსივნური უჯრედები აწარმოებენ დიდი რაოდენობით ეგზოზომებს, რომლებიც გადაეცემა კიბოს უჯრედებიდან გაუაზრებელ უჯრედებამდე, რომლებიც, თავის მხრივ, მონაწილეობენ ონკოგენეზში, დეგრადაციაში და უჯრედულ სიგნალიზაციაში.92 კვლევებმა აჩვენა, რომ ეგზოსომებს შეუძლიათ ონკოგენების გადატანა ნორმალურ უჯრედებში პათოლოგიური პროცესების დროს, რაც შესაძლოა იყოს სიმსივნის შეჭრისა და მეტასტაზების ერთ-ერთი მექანიზმი.ეგზოსომების როლი კიბოს პროგრესირებაში შეიძლება იყოს დინამიური და სპეციფიკური კიბოს ტიპისთვის. შუამავლობს უჯრედულ სიგნალიზაციას და მეტაბოლიზმს.94 ეგზოსომების ტვირთის მოლეკულების მახასიათებლები და დინამიური ცვლილებები პირდაპირ ასახავს მშობლის სიმსივნური უჯრედების მახასიათებლებსა და დინამიურ ცვლილებებს,95 რაც ასევე წარმოადგენს ეგზოსომების გამოყენების საფუძველს კიბოს დიაგნოზსა და პროგნოზში, აგრეთვე ანტისიმსივნურ თერაპიაზე ინდივიდუალური პასუხის პროგნოზირებისთვის. ..96
ეგზოზომების იზოლირებისა და ანალიზის ტრადიციული ლაბორატორიული მეთოდები რთული, მრავალსაფეხურიანი და შრომატევადია, მათ შორის ულტრაცენტრფუგაცია, ფილტრაცია, ზომის გამორიცხვის ქრომატოგრაფია, იმუნოაფინურობის გამწმენდი, Western blotting, ფერმენტთან დაკავშირებული იმუნოსორბენტული ანალიზი (ELISA), PCR ანალიზი და ნაკადი.მინიატურული სისტემები და პლატფორმები ჩიპზე მიკრო/ნანოტექნოლოგიის გამოყენებით ფართოდ არის შემუშავებული ეგზოსომების სწრაფი, მოსახერხებელი ადგილზე იზოლაციისთვის.ნანონაწილაკების თვალთვალის ანალიზი (NTA) არის ფართოდ გამოყენებული მეთოდი ეგზოსომების ზომისა და კონცენტრაციის დასახასიათებლად, მათ შორის ისეთი მეთოდების ჩათვლით, როგორიცაა მაგნიტური ნანონაწილაკები და პოლიჰიდროქსიალკანოატები.მიკროსთხევად და ელექტროქიმიურ მეთოდებს ასევე შეუძლიათ სწრაფად აღმოაჩინონ ეგზოსომები მაღალი მოსავლიანობით.
ეგზოსომური ცილები მნიშვნელოვანი მარკერებია HCC-ის დიაგნოზისთვის.Arbelaiz-ის კვლევაში, 98 RasGAP SH3 შემაკავშირებელი პროტეინის (G3BP) და პოლიმერული იმუნოგლობულინის რეცეპტორის (PIGR) დონე მნიშვნელოვნად გაიზარდა HCC-დან წარმოებულ ეგზოსომებში და ორი ცილის სავარაუდო კომბინირებული ეფექტურობა აღემატებოდა AFP-ს.რკინის გადატვირთვა არის მნიშვნელოვანი ფაქტორი, რომელიც ხელს უწყობს HCC-ს განვითარებას.ცენგმა იტყობინება, რომ ჰეპციდინს შეუძლია მნიშვნელოვანი როლი შეასრულოს HCC-ის მიმართ რეზისტენტობაში.99 HCC პაციენტების შრატიდან მიღებულ ეგზოსომებს ჰქონდათ ჰეპციდინის mRNA ვარიანტების მნიშვნელოვნად მაღალი ასლის რაოდენობა, ვიდრე მათ ჯანმრთელ კოლეგებს, რაც მიუთითებს იმაზე, რომ ჰეპციდინი შეიძლება იყოს ახალი სადიაგნოსტიკო ბიომარკერი HCC-სთვის.14-3-3ζ პროტეინს ეგზოსომებში, რომელიც წარმოიქმნება 100 HCC-ით, შეუძლია შეამციროს T უჯრედების აქტივაცია, პროლიფერაცია და დიფერენციაცია და შეიძლება გამოიწვიოს T უჯრედების ტრანსფორმაცია მარეგულირებელ T უჯრედებად, რაც გამოიწვევს T უჯრედების დაქვეითებას.101 ამას მხარს უჭერს რამდენიმე კვლევა, რომელიც იკვლევს სიმსივნის აცილებას იმუნური მეთვალყურეობის შედეგად, 102, რამაც შეიძლება ხელი შეუწყოს HCC სიმსივნურ გენეზს.
პლაზმაში ან შრატში ecRNA-ს არსებობის გარდა, რნმ-ით გამდიდრებული ეგზოსომები შეიძლება გამოყენებულ იქნას არაინვაზიური რეალურ დროში სტადიისთვის ადრეულ სიმსივნის სკრინინგში და სიმსივნის ევოლუციის და თერაპიაზე პასუხის დასადგენად.ეგზოსომური miRNA-21-ის დონე სისხლის შრატში HCC ჯგუფში იყო 2,21-ჯერ მეტი ვიდრე CHB ჯგუფში, ხოლო HCC ჯგუფში 5,57-ჯერ მეტი იყო, ვიდრე ჯანმრთელ პოპულაციაში.ვანგის კვლევაში ეგზოსომებმა მნიშვნელოვნად გაზარდა HCC ციროზულ პაციენტებთან შედარებით AUC მნიშვნელობებით 0,83 (95% CI 0,74–0,93) და 0,94 (95% CI 0,88–1,00).104 მიღებულმა მონაცემებმა გაარკვია სპეციფიკური ეგზოსომური ტვირთის მოლეკულების ჩართვა ონკოგენეზის და HCC პროგრესირების რეგულირებაში.105 miR-221, miR-103, miR-181c, miR-181a, miR-93 და miR-26a შრატის ექსპრესია თანმიმდევრულია.და მეტასტაზები და miR21 დონეები გაცილებით მაღალი იყო HCC პაციენტებში, ვიდრე ჯანმრთელ კონტროლებში და ასევე CHB პაციენტებში.102 LncRNA-ს ჰქონდა პოტენციური დიაგნოსტიკური მნიშვნელობა HCC-ში.კვლევებმა აჩვენა, რომ HCC პაციენტების შრატიდან მიღებულ ეგზოზომებს აქვთ LINC00161, LINC000635 და lncRNA-ს მნიშვნელოვნად მაღალი დონე, რომელიც გააქტიურებულია ზრდის ფაქტორი-β ტრანსფორმირებით, ვიდრე პაციენტებში HCC-ის გარეშე, და ეს lncRNA-ები ძლიერ ასოცირდება TNM სტადიასთან და სიმსივნის მოცულობასთან.110 Conigliaro et al.აღმოჩნდა, რომ CD90+ ეგზოსომა გამოხატავს lncRNAH19-ის მაღალ დონეს, რაც მნიშვნელოვნად ზრდის სისხლძარღვთა ენდოთელური ზრდის ფაქტორის (VEGF) გამოყოფას და VEGF-R1 რეცეპტორის გამომუშავებას, რითაც ასტიმულირებს ანგიოგენეზს.93 ცირკრნმ არის ეგზოსომური რნმ-ების კიდევ ერთი ტიპი - გამოხატულია დაბალ, მაგრამ სტაბილურ დონეზე სახეობებში, ცირკრნმ ასევე აჩვენებს სპეციფიკურობას უჯრედის ტიპის, ქსოვილის ტიპის, განვითარების სტადიისა და მარეგულირებელი აქტივობისთვის.111 circRNA არის სადიაგნოსტიკო ბიომარკერები ადრეული და მინიმალური ინვაზიური კიბოსთვის.112 ბოლო კლინიკურმა კვლევებმა აჩვენა, რომ ინდივიდუალური miRNA-ების სპეციფიკა HCC-ის პროგნოზირებაში იდეალური არ არის.ამიტომ, კომპლექსური გამოვლენა მრავალი ანალიზის გამოყენებით (მაგ. miR-122 და miR-48a AFP-თან ერთად) შეიძლება გააუმჯობესოს ადრეული HCC-ის იდენტიფიკაცია და HCC-ის დიფერენცირება ციროზისგან.100
CHB და ღვიძლის ციროზის მქონე პაციენტები HCC-ის განვითარების ყველაზე გავრცელებული მაღალი რისკის ჯგუფია.მაღალი რისკის ჯგუფებისთვის, მდგრადი ვირუსოლოგიური პასუხის მიღწევის შემდეგ, უნდა შემუშავდეს ეკონომიური ზედამხედველობის სტრატეგია HCC რისკზე დაფუძნებული და ადრეული სკრინინგი არის HCC-ის დიაგნოსტიკისა და მკურნალობის გაუმჯობესების გასაღები ხარჯების ეფექტურობის მაღალი თანაფარდობით2. ..კიბოს ადრეული სკრინინგის მეთოდებს ბევრი შეზღუდვა აქვს: კიბოს ადრეული სკრინინგის ეფექტური მეთოდები არ არის შემუშავებული კიბოს უმეტესობისთვის და მათი დაცვა ჩვეულებრივ დაბალია.ადრეული სკრინინგის ტრადიციულ მეთოდებთან შედარებით, თხევადი ბიოფსიის ტექნოლოგიას აქვს აშკარა უპირატესობები: სინჯის აღების სიმარტივე, პანრაკის გამოვლენა, ნიმუშის კარგი რეპროდუქციულობა და ეფექტური პასუხი სიმსივნის ჰეტეროგენულობაზე.თხევადი ბიოფსიასთან დაკავშირებული მეთოდების ეფექტურობის გათვალისწინებით, მათი გამოყენება HCC სკრინინგში არ არის რუტინული ტესტირება.მოლეკულურ დონეზე ზუსტი გამოვლენის მიღწევების მიუხედავად, სითხის ბიოფსია ძვირი ჯდება HCC-ის გამოსავლენად სამიზნე პაციენტებში, რაც ზღუდავს მის ფართო გამოყენებას სპეციფიკურ ვიზუალიზაციის პროცედურებთან შედარებით, როგორიცაა ულტრაბგერითი და მაგნიტურ-რეზონანსული ტომოგრაფია.113,114 თუმცა, წინა კვლევამ აჩვენა, რომ თხევადი ბიოფსიამ აჩვენა მნიშვნელოვანი სარგებელი ხარისხზე მორგებული სიცოცხლის წლების (QALYs) თვალსაზრისით.115 ასევე ნაჩვენებია თხევადი ბიოფსიის სარგებელი კუჭისა და ნაზოფარინქსის ადრეული კარცინომის დროს.116,117 ამჟამინდელი შეხედულებაა, რომ თხევადი ბიოფსიას შეუძლია შეავსოს შრატის ბიომარკერები და რადიოლოგიური სკრინინგი სიმსივნეების გამოვლენისა და დიაგნოზის დროს.117 118
მიმდინარე ლიტერატურის მიხედვით, სითხის ბიოფსიის ტექნოლოგიამ აჩვენა მნიშვნელოვნად მაღალი მგრძნობელობა და სპეციფიკა ღვიძლის კიბოს მაღალი რისკის ჯგუფების ადრეულ სკრინინგში.სითხის ბიოფსიის ტიპის მიუხედავად, მას შეუძლია განასხვავოს HCC მაღალი რისკის მქონე პირებისგან HCC-ის გარეშე, რაც მიუთითებს ადრეული სკრინინგის მნიშვნელობაზე, რადგან აშკარაა განსხვავებები მაღალი რისკის მქონე და ჯანმრთელ პირებს შორის.ctDNA-ს აქვს ხანმოკლე ნახევარგამოყოფის პერიოდი და შეიძლება გამოყენებულ იქნას HCC-ის გამოსავლენად, ამიტომ სიმსივნისგან მიღებული cDNA-ის ნებისმიერ ცვლილებას შეუძლია რეალურ დროში წარმოადგინოს სიმსივნის პროგრესირების კონკრეტული მტკიცებულება, განსაკუთრებით მცირე სიმსივნეებისთვის.ctDNA-ს მაღალი დონე მიუთითებს კიბოს განვითარებასა და გავრცელებაზე და არის პროგრესირებისა და რეციდივის ადრეული მაჩვენებელი.გარდა ამისა, ctDNA-ს შედეგების საფუძველზე, პაციენტებს შეუძლიათ მიიღონ ინდივიდუალური მკურნალობა და შემდგომი დაკვირვება.119 მეთილაციის სპეციფიკური ადგილები შეიძლება იყოს უკეთესი მარკერი ვიდრე AFP HCC და ციროზული კვანძების ადრეული იდენტიფიკაციისთვის.HCC-ის რეზექტირებად შემთხვევებში, cDNA-ს მაღალი დონე მიუთითებს მიკროვასკულარულ ინვაზიაზე და პოსტოპერაციულ რეციდივზე და მეტასტაზებზე.ასლების რაოდენობის ცვლილებები დაკავშირებულია HCC-ით დაავადებული პაციენტების გადარჩენასთან.შეიძლება ვივარაუდოთ, რომ cDNA შეფასება შეიძლება იყოს ჩართული HCC-ის საერთო მკურნალობაში და cDNA შეიძლება იყოს თერაპიული მოდულაციის ეფექტური მაჩვენებელი.ctDNA-ში სპეციფიკურ გენეტიკურ მუტაციებზე დაფუძნებული მარკერები მიღებულია კლინიკური გაიდლაინებით ეფექტურობის პროგნოზირებისთვის და წამლის წინააღმდეგობის მონიტორინგისთვის.ctDNA ტესტირება შეიძლება იყოს ყველაზე სასარგებლო თხევადი ბიოფსიის ინსტრუმენტი ადრეული სკრინინგისთვის.CTC ასევე მნიშვნელოვან როლს ასრულებს მაღალი რისკის HCC ჯგუფების ადრეულ სკრინინგში.HCC-თან ასოცირებული CTC-ების სხვადასხვა მარკერებს განსაკუთრებული მნიშვნელობა აქვს HCC-ის დაწყებაში, განვითარებასა და განმეორებაში.როგორც მემბრანული ვეზიკულები, ეგზოსომები მონაწილეობენ უჯრედშორის კომუნიკაციებში, განსაკუთრებით HCC უჯრედებში.მოცირკულირე მიკრორნმ-ები სტაბილურია სისხლში და, შესაბამისად, შეიძლება უფრო სასარგებლო იყოს HCC-ის ადრეული სკრინინგისთვის.თანდათან აღმოაჩინეს ეგზოსომური ცილები და რნმ-ით მდიდარი ეგზოსომები და დადასტურდა მათი პროგნოზირებადი ეფექტურობა HCC-სთვის.საინტერესოა, რომ HCC-ის სხვადასხვა ეტიოლოგია ასევე შეიძლება ასოცირებული იყოს სხვადასხვა მუტაციასთან, ამიტომ ჩვენ შეგვიძლია შევარჩიოთ სხვადასხვა ბიომარკერები ადრეული სკრინინგისთვის HCC-ის სხვადასხვა ეტიოლოგიის საფუძველზე.120
თუმცა, სითხის ბიოფსიის მიმდინარე ტექნიკა საეჭვოა სტაბილურობის თვალსაზრისით და არ შეუძლია დამოუკიდებლად განახორციელოს HCC-ის ადრეული სკრინინგი ან მონიტორინგი, მაგრამ მაინც შეუძლია შეავსოს ინდივიდუალური სკრინინგს და დიაგნოზს.121 როგორც თხევადი ბიოფსიის ფორმა, ctDNA, CTC, cfRNA და ეგზოსომასთან ასოცირებული AFP ან PIVKA-II გამოვლენას და გამოსახულებას აქვს იმედისმომცემი გამოყენება HCC-ის ადრეულ დიაგნოზსა და პროგნოზში.თუმცა, სისხლში ctDNA-ს გამოყოფის ზუსტი მექანიზმი ჯერ კიდევ გასარკვევია.ctDNA-ს ძირითადი ბიოლოგიური თვისებების გამოვლენამ შეიძლება ხელი შეუწყოს მის მარკერად გამოყენებას.ცირკულაციაში ctDNA-ს მცირე რაოდენობა და ნიმუშის დამუშავების მკაცრი მოთხოვნები წარმოადგენს გამოწვევას HCC-ში cDNA-ს გამოვლენის კლინიკური განხორციელებისთვის.გარდა ამისა, გენეტიკურ მუტაციებს არ გააჩნიათ სპეციფიკური მახასიათებლები, რომლებიც კანცეროგენების ზუსტი იდენტიფიკაციის საშუალებას იძლევა.იმის გამო, რომ მრავალი გენეტიკური და სომატური ვარიანტი ასევე არის ნორმალურ ქსოვილებში, გენეტიკური მუტაციები, რომლებიც გამოვლენილია სითხის ბიოფსიით, შეიძლება შეზღუდული იყოს HCC-ის ადრეულ სკრინინგში.122 კარგად განსაზღვრული სასარგებლო გენის სამიზნეების და ბიომარკერების შეზღუდვები, რომლებიც ხელს უწყობენ cDNA-ს დიფერენცირებას არასიმსივნური დნმ-ისგან, ყველაზე მნიშვნელოვანი საკითხია cDNA-ს გამოყენებისას.მგრძნობიარე და სპეციფიკური მარკერების ნაკლებობა CTC-ების გამოვლენისთვის.ნაპოვნია მხოლოდ სიცოცხლისუნარიანი უჯრედები მეტასტაზური პოტენციალით და CSC გამდიდრებული მარკერების ოპტიმალური კომბინაცია გაურკვეველი იყო.CTC-ების იზოლაცია კულტურისთვის და მათი მუტაციური პროფილების შეფასება ასევე რთული ამოცანაა.ეგზოსომების იდენტიფიკაციასთან, იზოლაციასთან და გაწმენდასთან დაკავშირებული პრობლემების გამო, სპეციფიკური მოლეკულური მექანიზმი ჯერ კიდევ გაურკვეველია და წინა კვლევები ეგზოსომებისა და HCC მექანიზმის შესახებ არ ყოფილა სიღრმისეული, და როგორ ხდება miRNA, lncRNA და ცილების ეგზოსომებად დალაგება. და არ არის ნათელი, არის თუ არა ეგზოსომების შეწოვა კონკრეტული ტიპის პროცესი.ეგზოსომების გამოყენება HCC-ის დიაგნოსტიკისა და მკურნალობისთვის ჯერ კიდევ პრეკლინიკურ სტადიაზეა.თხევადი ბიოფსიის პროცედურების სტანდარტიზაციის ნაკლებობამ, როგორიცაა მილების ტიპი, რომელიც გამოიყენება სისხლის შესაგროვებლად, სისხლის მოცულობის, ნიმუშის შესანახად და გამოვლენის, იზოლაციისა და გამდიდრების მიზნით, შეიძლება გამორიცხოს მათი გამოყენება რუტინულ კლინიკურ პრაქტიკაში სამედიცინო ცენტრებში არსებული პრაქტიკის განსხვავებების გამო.თხევადი ბიოფსიის ეფექტურობა ადრეულ სკრინინგში, დიაგნოზში, ეფექტურობის შეფასებასა და HCC-ის პროგნოზირებაში რჩება შესასწავლად, განსაკუთრებით მაღალი რისკის ჯგუფებისთვის.თხევადი ბიოფსიის ტექნოლოგიას დიდი პოტენციალი აქვს და სავარაუდოდ, უახლოეს მომავალში ფართოდ გამოიყენებს ღვიძლის კიბოს კლინიკურ პრაქტიკაში.
1. Sung H., Furley J., Siegel RL და სხვ.კიბოს გლობალური სტატისტიკა 2020: GLOBOCAN აფასებს ავადობას და სიკვდილიანობას კიბოს 36 ტიპისგან 185 ქვეყანაში.CA კირჩხიბი J Clin.2021; 71 (3): 209-249.doi: 10.3322/caac.21660
2. ჯანდაცვის ეროვნული კომისიის შტაბი.ღვიძლის პირველადი კიბოს დიაგნოსტიკისა და მკურნალობის კრიტერიუმები (2022 წლის გამოცემა) [J].ღვიძლის კლინიკური დაავადებების ჟურნალი, 2022, 38 (2): 288-303.doi: 10.3969/j.issn.1001-5256.2022.02.009
3. Zhou J, Sun H, Wang Z და სხვ.გაიდლაინები ჰეპატოცელულარული კარცინომის დიაგნოსტიკისა და მკურნალობისთვის (2019 წლის გამოცემა).Ღვიძლის კიბო.2020; 9 (6): 682-720.doi: 10.1159/000509424
4. კოკუდო ნ, ტაკემურა ნ, ჰასეგავა კ და სხვ.ჰეპატოცელულარული კარცინომის კლინიკური პრაქტიკის გაიდლაინები: ღვიძლის დაავადებების იაპონური საზოგადოება, 2017 (JSH-HCC მე-4 გაიდლაინები), 2019 განახლება.ღვიძლის დაავადების რეზერვუარი.2019; 49 (10): 1109-1113.doi:10.1111/hepr.13411
5. Barrera-Saldana HA, Fernandez-Garza LE, Barrera-Barrera SA თხევადი ბიოფსია ღვიძლის ქრონიკული დაავადების დროს.ენ ჰეპატო.2021; 20:100197.doi:10.1016/j.aohep.2020.03.008
6. Tai TKYu., Tan P.Kh.თხევადი ძუძუს კიბოს ბიოფსია: ორიენტირებული მიმოხილვა.Arch Pathol Lab Med.2021; 145 (6): 678-686.doi: 10.5858/arpa.2019-0559-RA
7. Kanval F., Singal AG Surveillance for hepatocellular carcinoma: მიმდინარე საუკეთესო პრაქტიკა და სამომავლო მიმართულებები.გასტროენტეროლოგია.2019; 157 (1): 54-64.doi:10.1053/j.gastro.2019.02.049
8. ევროპის კვლევითი ასოციაცია L, ევროპული ორგანიზაცია R, C Therapeutics.კლინიკური გაიდლაინები EASL-EORTC: ჰეპატოცელულარული კარცინომის მკურნალობა.J ჰეპარინი.2012; 56 (4): 908-943.doi:10.1016/j.jhep.2011.12.001
9. Zhang G., Ha SA, Kim HK et al.AFP და HCCR-1-ის კომბინირებული ანალიზი, როგორც სასარგებლო სეროლოგიური მარკერები მცირე ჰეპატოცელულურ კარცინომაში: პერსპექტიული კოჰორტის კვლევა.დის მარკ.2012; 32 (4): 265-271.doi: 10.3233/DMA-2011-0878
10. ჩენ ს, ჩენ ჰ, გაო ს და სხვ.პლაზმური მიკრორნმ-125b-ის დიფერენციალური გამოხატულება B ჰეპატიტის ვირუსთან ასოცირებულ ღვიძლის დაავადებაში და B ჰეპატიტის ვირუსით გამოწვეული ჰეპატოცელულარული კარცინომის დიაგნოსტიკური პოტენციალი.ღვიძლის დაავადების რეზერვუარი.2017; 47 (4): 312-320.doi:10.1111/hepr.12739
11. Halle PR, Foster F., Kudo M. et al.ალფა-ფეტოპროტეინის ბიოლოგია და მნიშვნელობა ჰეპატოცელულურ კარცინომაში.ღვიძლის ინტ.2019; 39 (12): 2214–2229.doi: 10.1111/liv.14223
12. Omata M, Cheng AL, Kokudo N, et al.კლინიკური გაიდლაინები ჰეპატოცელულარული კარცინომის მკურნალობისთვის აზია-წყნარი ოკეანის რეგიონში: 2017 განახლება.ღვიძლის დაავადებების საერთაშორისო ორგანიზაცია.2017; 11 (4): 317-370.doi: 10.1007/s12072-017-9799-9
13. Xu Fei, Zhang Li, He Wei et al.PIVKA-II შრატის დიაგნოსტიკური მნიშვნელობა ცალკე ან AFP-თან ერთად ჰეპატოცელულარული კარცინომის მქონე ჩინელ პაციენტებში.დის მარკ.2021; 2021: 8868370.doi: 10.1155/2021/8868370
14. დურინი ლ., პრარადინს ა., ბასეტ ს. და სხვ.ფილტვის არაწვრილუჯრედოვანი კიბო არაპლაზმური ჰუმორული სითხის ბიოფსია: უფრო ახლოს სიმსივნესთან!უჯრედი.2020; 9 (11).doi: 10.3390/cells9112486
15. Mader S, Pantel K. თხევადი ბიოფსია: მიმდინარე მდგომარეობა და სამომავლო პერსპექტივები.მკურნალობა Oncol Res.2017;40(7-8):404-408.doi: 10.1159/000478018
16. Palmirotta R, Lovero D, Cafforio P, და სხვ.თხევადი დაფუძნებული კიბოს ბიოფსია: მულტიმოდალური დიაგნოსტიკური ინსტრუმენტი კლინიკურ ონკოლოგიაში.The Adv Med Oncol.2018; 10:1758835918794630.დოი: 10.1177/1758835918794630
17. Mandel P., Metais P. ნუკლეინის მჟავები ადამიანის პლაზმაში.CR Seances Soc Biol Fil.1948; 142 (3-4): 241-243.
18. Mouliere F, Chandrananda D, Piskorz AM, et al.მოცირკულირე სიმსივნის დნმ-ის გაფართოებული გამოვლენა ფრაგმენტის ზომის ანალიზით.მეცნიერება თარგმნის მედიცინას.2018; 10:466.doi:10.1126/scitranslmed.aat4921
19. Underhill HR, Kitzman JO, Hellwig C. et al.მოცირკულირე სიმსივნის დნმ-ის ფრაგმენტის სიგრძე.PLOS გენები.2016; 12 (7): e1006162.doi:10.1371/journal.pgen.1006162
20. Cheng F, Su L, Qian C. მოცირკულირე სიმსივნის დნმ: პერსპექტიული ბიომარკერი თხევად დაფუძნებულ კიბოს ბიოფსიაში.სამიზნე სიმსივნე.2016; 7 (30): 48832–48841.doi:10.18632/oncotarget.9453
21. Bettegovda S., Sauzen M., Leary RJ და სხვ.მოცირკულირე სიმსივნის დნმ-ის გამოვლენა ადამიანის ავთვისებიანი სიმსივნეების ადრეულ და გვიან სტადიებში.მეცნიერება თარგმნის მედიცინას.2014; 6 (224): 224ra24.doi:10.1126/scitranslmed.3007094
22. Mehes G. თხევადი ბიოფსია მყარი კიბოს მუტაციური პროგნოზირებადი ანალიზისთვის: პათოლოგიის პერსპექტივა.J ბიოტექნოლოგია.2019; 297:66-70.doi: 10.1016/j.jbiotec.2019.04.002
[PubMed] 23. Lenarts L, Tuveri S, Yatsenko T, et al.სიმსივნის ადრეული გამოვლენა პლაზმური დნმ-ის სკრინინგით: აჟიოტაჟი თუ იმედი?ბელგიის კლინიკური სამართალი.2020 წელი;75(1):9-1 დოი:10.1080/17843286.2019.1671653
24. Nishida N. ჰეპატიტის ვირუსისა და დაბერების ეფექტი დნმ-ის მეთილაციაზე ადამიანის ჰეპატოკარცინოგენეზში.ჰისტოპათოლოგია.2010; 25 (5): 647-654.დოი: 10.14670/HH-25.647